免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些?1)、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液,怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果?另外,不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果,抗原抗体反应有前带和后带效应,必须摸索比较好浓度。2)、抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验,这是比较好的时间和次数。若不行,还可高压修复。3)、组织切片本身这种抗原含量低;4)、血清封闭时间过长。5)、DAB孵育时间过短。6)、细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应。7)、开始做免疫组化,我建议你一定要首先做个阳性对照片,排除抗体等外的方法问题。LabEx提供MSD超敏电化学发光平台服务!msd第三代电化学发光
流式多因子检测技术(CBA)微球免疫分析系统CBA(CytometricBeadArray)是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。CBA是种结合流式细胞仪荧光检测和微球免疫分析的应用技术,可以轻松的在短时间内,同时检测多种蛋白,其作用原理利用荧光强度不同的微球,上面带有可以辨认特定蛋白的抗体(captureantibody),与样本(例如血清、血浆、培养上清液、细胞裂解液等)及PE检测抗体(detectionantibody)作用后,以流式细胞仪进行分析,根据PE荧光强度的不同用FCAPArray软件进行分析和标准品做比对后,可进行样本内特定,蛋白的定性或定量。CBA具有以下优点:每次检测需25-50ul样本;灵敏度可达0.274pg/ml时间t夬速,需3-4小时,快速上样可同时测定30种蛋白,实验可重复性高利用FCAPArray软件,不论样本数目多少,可快速分析完成分析炎症因子检测ELISA多因子技术样本需求量少,检测指标多,可兼容血清,裂解液,脑脊液等多种生物学体液。
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Luminex液相悬浮芯片是基于高通量微孔板的多重检测抗体芯片技术。其基本原理是将高度特异的捕获单克隆抗体偶联到不同荧光标记的磁珠上,将不同种类磁珠混合后悬浮于96孔微孔板中。在检测时,一束激光照射磁珠上的荧光,识别磁珠标记的捕获抗体,从而获知该磁珠可检测哪种细胞因子,从而实现“定性”作用。进一步,通过加入生物素标记的高亲和配对检测抗体,同步识别磁珠抓取的目标细胞因子,形成“三明治”结构,并加入SA-PE偶联上生物素,通过另一束激光照射进行信号放大检测,实现“定量”作用。多因子技术服务我们LabEx是专业!
LabEx多因子检测技术--液相悬浮技术经典炎症十因子、高通量细胞因子初筛液相悬浮芯片:高度特异的捕获单克隆抗体偶联到不同荧光标记的磁珠上,将不同种类磁珠混合后悬浮于96孔微孔板中。进一步加入生物素标记的高亲和配对二抗结合SA-PE进行信号放大,以实现对多种微量细胞因子的有效检测。利用梯度稀释的标准品检测信号构建标准曲线,实现大量目标样本中多因子的同时检测和准确定量。特点1、既能检测蛋白,又能检测核酸2、既能用于临床,又能用于多学科科研领域3、真正意义的“高通量”检测,一次检测100个指标4、在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平LabEx提供酶联免疫吸附实验(ELISA)检测服务!msd第三代电化学发光
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多重荧光免疫组化技术优势1.由于每次体系中都只有单一抗体孵育,因此无需担心抗体交叉反应,以及一抗二抗种属匹配问题,减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。2.TSA技术可以用于检测用传统方法无法检出的低丰度靶标。基于酪酰胺的信号放大技术能够提供极强的敏感度、检测极微量的目的抗原。极大的降低抗体的用量,节约抗体,实测确实可以提升抗体的稀释比例。3.荧光法多重免疫组化,可同时进行五个颜色通道以上,这种情况下发射光谱会重叠,我们可以借助多光谱成像系统来解决这个问题。这是传统间接荧光法染色和显色法多重免疫组化所做不到的。这种方法能真实反映关键蛋白的表达情况和相互之间的关系,从而极大地节约珍贵的样品。msd第三代电化学发光
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